EdU染色

服務(wù)介紹：

EdU（5-Ethynyl-2’- deoxyuridine）是一種胸腺嘧啶核苷類似物，能夠在細(xì)胞增殖時(shí)期代替胸腺嘧啶（T）滲入正在復(fù)制的DNA分子中，通過基于EdU與Apollo®熒光染料的特異性反應(yīng)快速檢測細(xì)胞DNA復(fù)制活性，適用于細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化、生長與發(fā)育、DNA修復(fù)、病毒復(fù)制、細(xì)胞標(biāo)記示蹤等方面。

實(shí)驗(yàn)流程：

1 每孔加入100μL滲透劑(0.5% TritonX-100的PBS)脫色搖床孵育10分鐘；PBS清洗1次，5分鐘。

2每孔加入100 μL的EDU染色反應(yīng)液（配置比例見下表），避光、室溫、脫色搖床孵育30分鐘后，棄染色反應(yīng)液；

3染核：爬片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上避光晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后滴加dapi染液，或hochest染液室溫避光染核10min。

4封片：爬片用PBS（PH7.4）洗滌3次，每次5min。爬片稍甩干后將有細(xì)胞的一面朝下用抗熒光淬滅封片劑將玻片封固在載玻片上封片。

5 鏡檢拍照：切片于尼康正置熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。（紫外激發(fā)波長330-380nm，發(fā)射波長420nm；FITC綠光激發(fā)波長465-495nm，發(fā)射波長515-555 nm；555紅光激發(fā)波長550nm，發(fā)射波長590nm）

結(jié)果判讀：

DAPI染出來的細(xì)胞核在紫外的激發(fā)下為藍(lán)色，陽性表達(dá)為相應(yīng)熒光素標(biāo)記的紅光或者綠光

送樣運(yùn)輸要求：

1.組織樣本放置于20倍樣本體積的固定液中固定24h以上，常溫運(yùn)輸送樣。

2.石蠟切片常溫保存運(yùn)輸

3.冰凍切片-20℃保存運(yùn)輸

4.細(xì)胞爬片PFA固定15min后用無菌PBS洗滌后用無菌PBS浸泡，4℃冰袋保存運(yùn)輸?shù)綄?shí)驗(yàn)室。

注意事項(xiàng)：

1.檢測之前需動(dòng)物活體注射化學(xué)試劑EdU，細(xì)胞需用化學(xué)試劑EdU處理造模，否則無陽性。